BlazeTaq™ Probe One-Step RT-qPCR kit是基于探针法的Real Time One-Step RT-PCR反应试剂。试剂盒以RNA为模板,逆转录反应和定量检测可在同一反应管内完成,简化操作的同时可有效降低污染的风险。试剂盒包含了性能优异的逆转录酶,以及含有热启动Taq DNA聚合酶、dNTP和必需的缓冲液成分混合而成的5×预混液。
经测试表明,BlazeTaq™ Probe One-Step RT-qPCR kit与各种常用Real Time PCR仪器兼容,并在RNA检测的灵敏度和特异性方面优于竞争对手的产品。
BlazeTaq™ Probe One-Step RT-qPCR kit使用BlazeTaq RTase Mix将RNA逆转录成cDNA,并使用热启动Taq DNA聚合酶进行cDNA扩增,在DNA扩增期间,与DNA上的靶点结合的靶特异性探针被Taq DNA聚合酶的5′-3’核酸外切酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,报告基团释放并发出荧光。
图1. BlazeTaq™ Probe One-Step RT-qPCR kit(红色)与Competitor P试剂盒(蓝色)产品的性能比较。使用BlazeTaq™ Probe One-Step RT-qPCR kit,对HeLa细胞RNA提取物中ACTB(A)、GAPDH(B)和B2M(C)水平进行分析,RNA提取物以10倍梯度稀释成6个样本,总量的范围为10 ng至0.1 pg。
图2. 使用BlazeTaq™ Probe One-Step RT-qPCR kit,对HeLa细胞RNA提取物中ACTB(A)、GAPDH(B)和B2M(C)水平进行单通道和三通道分析,RNA提取物以10倍梯度稀释成7个样本,总量的范围为100 ng至0.1 pg,结果显示,单通道和三通道的扩增效率相同。
图3. BlazeTaq™ Probe One-Step RT-qPCR kit(蓝色)与Competitor 试剂盒(红色)产品的性能比较。对HeLa细胞RNA提取物中GAPDH水平进行分析。RNA提取物以10倍梯度稀释成6个样本,总量的范围为100 ng至1 pg。